4  測試方法

4.1  方法提要

   本方法采用計數濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養基，經若干時間，在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，從而判定潔凈環境內單位體積空氣中的活微生物數，以此來評定潔凈室（區）的潔凈度。

4.2  所用的儀器、設備和培養基

    a）浮游菌采樣器；

    b）真空抽氣泵；

    c）培養皿；

    d）培養基；

    e）恒溫培養箱。

4.3  浮游菌采樣器

    浮游菌采樣器宜采用撞擊法機理的采樣器，一般采用狹縫式采樣器或離心式采樣器。

4.3.1  采用的浮游菌采樣器必須要有流量計和定時器。

4.3.2  狹縫式采樣器的原理

   狹縫式采樣器由附加的真空抽氣泵抽氣，通過采樣器的縫隙式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉的平板培養基表面上，附著的活微生物粒子經培養后形成菌落，予以計數。

4.3.3  離心式采樣器的原理

   離心式采樣器由于內部風機的高速旋轉，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固形培養條上，經培養后形成菌落，予以計數。

4.3.4  狹縫式采樣器的使用要點

    應嚴格按儀器說明書的要求進行操作。

4.3.4.1  校驗

   采樣器必須按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數據的可靠性。校驗的項目有：定時器、轉盤轉速、流量計。

4.3.2  每次測試前應按說明書上的規定，先接通電源，啟動真空抽氣泵，然后調節流量計及定時器。

4.3.4.3 空氣采樣量根據需要選定。已知采樣器的流量（L/min），設定采樣時間（min），兩者相乘即采樣量（L）。

4.3.4.4  注意事項

4.3.4.4.1  采樣口必須用便于消毒及化學性能穩定的材料制造。

4.3.4.4.2  采樣管嚴禁滲漏，內壁應光滑。

4.3.4.4.3  采樣管的長度應根據測點的高度定，盡量減少彎曲。

4.4  真空抽氣泵

4.4.1  真空抽氣泵的排氣量應與采樣器匹配。

4.4.2   宜采用無油真空抽氣泵，必要時可在非氣口安裝氣體過濾器。

4.4.3  真空抽氣泵安裝的位置必須適當，一般裝在采樣器下面。

4.5  培養皿

4.5.1  狹縫式采樣器一般采用? 150mm×15mm、? 90mm×15mm、?65mm×15mm三種規格的硼硅酸玻璃培養皿。可根據所選用采樣器選擇合適的培養皿。

4.5.2  離心式采樣器采用專用的固形培養條。

4.6  培養基

    普通肉湯瓊脂培養基或其他藥典認可的培養基。其配制方法見附錄A（標準的附錄）。

4.7  恒溫培養箱

    必須定期對培養箱的溫度計進行檢定。

4.8  測試步驟

4.8.1  測試前儀器、培養皿表面必須嚴格消毒。

4.8.1.1  采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器宜一直放在被測房間內。

4.8.1.2  用消毒劑擦凈培養皿的外表面。

4.8.1.3 采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內外面，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤。

4.8.1.4 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉并晾干。

4.8.1.5  采樣者應穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒。

4.8.2  狹縫式采樣器的采樣程序

4.8.2.1 儀器經消毒后先不放入培養皿，開動真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發，時間不少于5min，并調好流量、轉盤轉速。

4.8.2.2  關閉真空泵，放入培養皿，蓋上蓋子后調節采樣器縫隙高度。

4.8.2.3  置采樣口于采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，轉動定時器，根據采樣量設定采樣時間。

4.8.3  培養

4.8.3.1  全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。

4.8.3.2  在30℃～35℃培養箱中培養，時間不少于48h。

4.8.3.3  每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。

4.8.4  菌落計數

4.8.4.1  用肉眼直接計數、標記或在菌落計數器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.8.4.2  若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數。

4.8.5  注意事項

4.8.5.1  使用前仔細檢查每個培養皿的質量，培養基及培養皿有變質、破損或污染的不能使用。

4.8.5.2  采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染。

4.8.5.3  對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

4.8.5.4 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養基沉淀物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。