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發(fā)布日期:2022-05-30 點擊率:56
PCR儀即基因擴增儀,實際就是一個溫控設(shè)備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進行溫度控制。主要由外殼、變溫反應腔、散熱系統(tǒng)、加熱系統(tǒng)、制冷系統(tǒng)、電子控制系統(tǒng)、供電系統(tǒng)、人機界面等各部分組成。
PCR儀的原理:
利用升溫使DNA變性,用限制性內(nèi)切酶使DNA雙鏈解鏈,在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈,進而達到基因復制的目的。
PCR儀的技術(shù)特性:
1、加熱模式:立體膜加熱技術(shù);
2、制冷技術(shù):新一代“peltier”效應“半導體熱泵制冷”;
3、控溫及管理:16位微機智能式;
4、單機操作,也可與電腦聯(lián)機使用,通過數(shù)據(jù)線可直觀顯示溫度變化曲線;
5、溫度范圍廣,除基本功能外還具備停電保護,長時間高低溫處理,低溫培養(yǎng),循環(huán)套循環(huán)等各種增強功能,可用于各種條件要求的PCR實驗。
PCR的分類:
根據(jù)DNA擴增的目的和檢測的標準可以將PCR儀分為:普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR,實時熒光定量PCR儀等幾類。
1、普通PCR儀
一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀,也就是傳統(tǒng)的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。普通PCR儀主要應用于科研、教學、臨床醫(yī)學、檢驗、檢疫等。
2、梯度PCR儀
一次性PCR擴增可設(shè)置一系列不同的退火溫度條件的稱之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其適合的退火溫度不同,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的適合退火溫度進行有效的擴增。
梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節(jié)約時間,也節(jié)約成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用,多應用于科研、教學機構(gòu),檢驗、檢疫等。
3、原位PCR儀
原位PCR是保持細胞或組織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置上進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA,而且還可以了解靶DNA存在于何種細胞中,更有利于探討靶DNA與細胞之間的關(guān)系。
原位PCR儀主要應用于:檢測外源性基因片段,提高檢出率,集中在病毒感染的檢查上;觀察病原體在體內(nèi)分布規(guī)律、內(nèi)源性基因片段;檢測導入基因;遺傳病基因檢測。
4、實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀設(shè)計基礎(chǔ)上增加熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量功能的PCR儀器。在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結(jié)果輸出。
熒光定量PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道;有多種熒光標記的時候使用多通道。多通道利于做多重PCR,實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。
熒光定量PCR儀主要應用于臨床醫(yī)學檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。熒光定量檢測技術(shù)在臨床診斷方面很多,主要集中在各種病原體引起疾病的臨床診斷與優(yōu)生優(yōu)育相關(guān)的疾病以及肺結(jié)核等。
標簽: PCR儀
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